Terapia epigenómica para la Enfermedad Cerebrovascular Isquémica

Tema: La inhibición de la histona desacetilasa 2 (HDAC 2) promueve la recuperación funcional de la Enfermedad Cerebrovascular Isquémica
Mecanismo epigenómico:	Desacetilación de histonas
¿Cómo se      hizo?	-El ictus focal fue inducido por fototrombosis -Se microinyectó LV ‐ HDAC2 ‐ shRNA ‐ GFP, LV ‐ GFP, Ad ‐ HDAC2 ‐ Flag o Ad ‐ inactive ‐ HDAC2 ‐ Flag en el área peri ‐ infarto inmediatamente después del ictus isquémico.  -Los inhibidores de HDAC se microinyectaron en el área peri-infarto de 4 a 10 días después del accidente cerebrovascular isquémico. -Se realizaron tareas de caminar en cuadrícula y de cilindros para evaluar la función motora.
Resultados:	-HDAC ceba epigenéticamente la expresión de genes relacionados con la neuroplasticidad para rescatar la disminución de la neuroplasticidad de la corteza peri-infarto. -La pérdida de HDAC2 facilitó la recuperación funcional, mientras que la sobreexpresión de HDAC2 perjudicó la recuperación funcional. -El tratamiento tardío con el inhibidor de pan-HDAC produjo una recuperación funcional sustancial en ratones WT, pero fue ineficaz en ratones Hdac2 CKO.  -HDAC2 regula negativamente la plasticidad neuronal mediante la supresión epigenética de la expresión de genes asociados a la neuroplasticidad. -El desarrollo de inhibidores específicos de HDAC2 puede abrir una nueva vía en la recuperación del accidente cerebrovascular isquémico.

Resumen esquemático:  

                                  HDACis ceba epigenéticamente 

                         el expresión de genes relacionados con la 

neuroplasticidad para rescatar la disminución de la de la corteza peri-infarto.

Referencias Bibliográficas:
1. https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC5721897/

Técnica de edición de Ácidos Nucleicos para la Enfermedad Cerebrovascular Isquémica 

La inhibición de Sema4D / PlexinB1 mejora el daño de la barrera hematoencefálica y el resultado después de un Ictus Isquémico en ratas
1.Tipo de  Edición:	In vivo; Células somáticas de ratas
2. Dirigidas hacia:	ADN: Inhibición de Semaforina 4D (Sema4D) / PlexinB1
3. Dirigidas por:	ARN y enzimas combinadas: CRISPR/ Cas9 -ARN guía único (ARNsg)
4. Uso de vectores:	Lentivirus de PlexinB1
5. Órgano o célula a tratar:	Células murales/ pericitos de la arteria cerebral media
6. Vía de administración:	Parenteral
7. Resultados:	Corto plazo: Mejora la permeabilidad de la barrera hematoencefálica (BHE), interrumpe las proteínas de unión estrecha (TJ) y evita el infarto. Mediano plazo: Reduce la degradación de la BHE y disminuye la respuesta inflamatoria.  Largo plazo:  Nuevos métodos terapéuticos para mejorar el tratamiento en la fase aguda de la ECV Isquémica.

Figura B: Daño de la BHE por la señalización
de Sema4D / PlexinB1

Referencias Bibliográficas:
1. https://faseb.onlinelibrary.wiley.com/doi/full/10.1096/fj.201700786RR

Terapia regenerativa con Stem Cells para Enfermedad Cerebrovascular isquémica

Tipo de Stem Cell: Células madre neuronales (NSC)

Métodos de Obtención: 
-Directamente de nichos neurogénicos: De la circunvolución dentada del hipocampo y de los los ventrículos laterales, de tejido neural adulto o fetal y expandido in vitro. 
-Células pluripotentes inducidas (iPSC): Se reprograman las NSC a partir de iPSC derivadas de factores de transcripción, microARN, plásmidos y otros morfógenos.
-Células madres embrionarias (CME): Las NSC se pueden generar a partir del blastocisto mediante combinaciones de factores de diferenciación. (1)

Vía de administración: 
Parenteral:

-Vía intracraneal en el parénquima penumbral o dañado 

-Vía intravenosa que proporciona una ruta más directa a la lesión y mejor supervivencia (1)

Resultados:

-Corto plazo: Regulación de moléculas inflamatorias como TNF-α, MCP-1, IL-1β, IL-6 e Iba-1.

-Mediano plazo: Promoción de la angiogénesis, que se acopla a la neurogénesis. 

-Largo plazo: Neurorestauración de las células dañadas en el tejido cerebral afectado por isquemia. 

Métodos de obtención de NSC

Referencia Bibliográfica:

1. https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/29895321/

ADN recombinante en la naturaleza

El ADN recombinante en la naturaleza se presenta de forma natural por procesos como la infección viral, la reproducción sexual y la transformación bacteriana. Un ejemplo de esto es la conjugación de bacterias mediante los pilis sexuales y la transferencia de plásmidos  (moléculas circulares de ADN) para así propagar la virulencia entre los Biofilms bacterianos. (1,2)

ADN recombinante artificial en la Enfermedad Cerebrovascular Isquémica 

El rt-PA intravenoso (activador del plasminógeno de tipo tisular recombinante) que incluye al fármaco alteplasa, tiene eficacia para mejorar los resultados en la enfermedad cerebrovascular isquémica ya que aumenta la tasa de recanalización por medio de la activación del plasminógeno a plasmina, la cual a su vez produce la disolución del coágulo de fibrina y la formación de productos de degradación de la fibrina. En el estudio se pudo comprobar la eficacia de el rt-PA para la ECV Isquémica incluso en pacientes que están tratados con NOAC. (3)

Ejemplo de un animal transgénico

La peste porcina clásica (PPC) causada por el virus de la peste porcina clásica (CSFV) es una de las enfermedades más perjudiciales y genera importantes pérdidas económicas en la industria porcina. Por ende en el estudio se produjeron cerdos transgénicos (TG) anti-CSFV mediante transferencia nuclear somática (SCNT) y se demostró que estos cerdos transgénicos podrían limitar eficazmente la replicación del CSFV y reducir los signos clínicos y la mortalidad asociados al CSFV, y la resistencia a la enfermedad podría transmitirse de manera estable a la generación F1. (4)

(Cerdo transgénico de la F1)

Referencias Bibliográficas:
1. https://www.news-medical.net/life-sciences/What-is-Recombinant-DNA-(Spanish).aspx
2. http://www.agro.unc.edu.ar/~wpweb/genetica/wp-content/uploads/sites/12/2016/11/CAP%C3%8DTULO-16-.-RECOMBINACI%C3%93N-EN-BACTERIAS.pdf
2. https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/28119380/
3. https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/30543715/

Técnica molecular epigenómica: Secuenciación de miRNAs en Enfermedad Cerebrovascular Isquémica

Se realizó una Secuenciación de microARNs circulantes: miR-125a-5p, miR-125b-5p y miR-143-3p que se asociaron con la ECV isquémica. Se analizaron los niveles de expresión de estos miRNAs hasta 90 días después de la ECV y se reveló una normalización para controlar los niveles de miR-125b-5p y miR-143-3p a partir del día 2, mientras que miR-125a-5p permaneció elevado. Este procedimiento dio como resultado una sensibilidad: 85,6% y una  de especificidad: 76,3 % , es decir, este estudio fue más efectivo que una TAC , por ende puede tener una utilidad clínica como marcador de diagnóstico temprano. (1)

Referencias Bibliográficas:

1. https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/28724745/

Prueba de Tamizaje y confirmatoria de la Enfermedad Cerebrovascular Isquémica

Las pruebas de tamizaje permiten, de manera no tan específica pero estandarizada, conocer el estado en el que se encuentra determinado grupo poblacional en torno a una enfermedad. Para esto se han utilizado escalas de reconocimiento para la Enfermedad Cerebrovascular (ECV), la más recomendada por su sensibilidad, fue la : Escala de evaluación Cincinnati (CPSS) . Un resultado positivo en la escala indica alto riesgo de ECV y la necesidad de evaluación especializada urgente. Las escalas no diferencian entre ECV isquémico y hemorrágico; dicha diferenciación la hace en el hospital un neurólogo o un médico especializado en esa área con la ayuda de pruebas confirmatorias. (1)

Pruebas confirmatorias: estas permiten constatar por su alta especificidad que se trata de una Enfermedad Cerebrovascular y además nos posibilita diferenciar el tipo de ECV. Para esto se realizan los siguientes exámenes:

• Tomografía computarizada (TAC) de cráneo sin contraste: Sirve para el diagnóstico de ECV con signos de isquemia temprana. (2)
• Resonancia Magnética Nuclear (RMN): Más sensible que la TAC, detecta la isquemia cerebral aguda, en pacientes con síntomas dentro de las 12 horas. (2)

Referencias Bibliográficas:
1. https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/30964558/
2. https://www.intramed.net/contenidover.asp?contenidoid=86065

Prueba de Secuenciación o Hibridación para la Enfermedad Cerebrovascular Isquémica

En este estudio se utiliza la técnica de Hibridación fluorescente in situ (FISH) que es una manera de visualizar y mapear el material genético de genes específicos o partes de los genes, en este caso se lo utilizó  para determinar los polimorfismos 106PEAR1 (G> A) y 168PTGS1 (-842A> G), los mismos que tienen un gran impacto en la aparición de la enfermedad cerebrovascular isquémica. Después del análisis se llegó a la conclusión de que el genotipo AA del polimorfismo 106PEAR1 (G> A) fue más común, y que el alelo A también mostró una frecuencia más alta que el alelo G en las personas con ictus isquémico. (1)

Referencias Bibliográficas:
1. https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/31335702/