Terapia epigenómica para la Enfermedad Cerebrovascular Isquémica

Tema: La inhibición de la histona desacetilasa 2 (HDAC 2) promueve la recuperación funcional de la Enfermedad Cerebrovascular Isquémica
Mecanismo epigenómico:	Desacetilación de histonas
¿Cómo se      hizo?	-El ictus focal fue inducido por fototrombosis -Se microinyectó LV ‐ HDAC2 ‐ shRNA ‐ GFP, LV ‐ GFP, Ad ‐ HDAC2 ‐ Flag o Ad ‐ inactive ‐ HDAC2 ‐ Flag en el área peri ‐ infarto inmediatamente después del ictus isquémico.  -Los inhibidores de HDAC se microinyectaron en el área peri-infarto de 4 a 10 días después del accidente cerebrovascular isquémico. -Se realizaron tareas de caminar en cuadrícula y de cilindros para evaluar la función motora.
Resultados:	-HDAC ceba epigenéticamente la expresión de genes relacionados con la neuroplasticidad para rescatar la disminución de la neuroplasticidad de la corteza peri-infarto. -La pérdida de HDAC2 facilitó la recuperación funcional, mientras que la sobreexpresión de HDAC2 perjudicó la recuperación funcional. -El tratamiento tardío con el inhibidor de pan-HDAC produjo una recuperación funcional sustancial en ratones WT, pero fue ineficaz en ratones Hdac2 CKO.  -HDAC2 regula negativamente la plasticidad neuronal mediante la supresión epigenética de la expresión de genes asociados a la neuroplasticidad. -El desarrollo de inhibidores específicos de HDAC2 puede abrir una nueva vía en la recuperación del accidente cerebrovascular isquémico.

Resumen esquemático:  

                                  HDACis ceba epigenéticamente 

                         el expresión de genes relacionados con la 

neuroplasticidad para rescatar la disminución de la de la corteza peri-infarto.

Referencias Bibliográficas:
1. https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC5721897/

Técnica de edición de Ácidos Nucleicos para la Enfermedad Cerebrovascular Isquémica 

La inhibición de Sema4D / PlexinB1 mejora el daño de la barrera hematoencefálica y el resultado después de un Ictus Isquémico en ratas
1.Tipo de  Edición:	In vivo; Células somáticas de ratas
2. Dirigidas hacia:	ADN: Inhibición de Semaforina 4D (Sema4D) / PlexinB1
3. Dirigidas por:	ARN y enzimas combinadas: CRISPR/ Cas9 -ARN guía único (ARNsg)
4. Uso de vectores:	Lentivirus de PlexinB1
5. Órgano o célula a tratar:	Células murales/ pericitos de la arteria cerebral media
6. Vía de administración:	Parenteral
7. Resultados:	Corto plazo: Mejora la permeabilidad de la barrera hematoencefálica (BHE), interrumpe las proteínas de unión estrecha (TJ) y evita el infarto. Mediano plazo: Reduce la degradación de la BHE y disminuye la respuesta inflamatoria.  Largo plazo:  Nuevos métodos terapéuticos para mejorar el tratamiento en la fase aguda de la ECV Isquémica.

Figura B: Daño de la BHE por la señalización
de Sema4D / PlexinB1

Referencias Bibliográficas:
1. https://faseb.onlinelibrary.wiley.com/doi/full/10.1096/fj.201700786RR

Terapia regenerativa con Stem Cells para Enfermedad Cerebrovascular isquémica

Tipo de Stem Cell: Células madre neuronales (NSC)

Métodos de Obtención: 
-Directamente de nichos neurogénicos: De la circunvolución dentada del hipocampo y de los los ventrículos laterales, de tejido neural adulto o fetal y expandido in vitro. 
-Células pluripotentes inducidas (iPSC): Se reprograman las NSC a partir de iPSC derivadas de factores de transcripción, microARN, plásmidos y otros morfógenos.
-Células madres embrionarias (CME): Las NSC se pueden generar a partir del blastocisto mediante combinaciones de factores de diferenciación. (1)

Vía de administración: 
Parenteral:

-Vía intracraneal en el parénquima penumbral o dañado 

-Vía intravenosa que proporciona una ruta más directa a la lesión y mejor supervivencia (1)

Resultados:

-Corto plazo: Regulación de moléculas inflamatorias como TNF-α, MCP-1, IL-1β, IL-6 e Iba-1.

-Mediano plazo: Promoción de la angiogénesis, que se acopla a la neurogénesis. 

-Largo plazo: Neurorestauración de las células dañadas en el tejido cerebral afectado por isquemia. 

Métodos de obtención de NSC

Referencia Bibliográfica:

1. https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/29895321/

ADN recombinante en la naturaleza

El ADN recombinante en la naturaleza se presenta de forma natural por procesos como la infección viral, la reproducción sexual y la transformación bacteriana. Un ejemplo de esto es la conjugación de bacterias mediante los pilis sexuales y la transferencia de plásmidos  (moléculas circulares de ADN) para así propagar la virulencia entre los Biofilms bacterianos. (1,2)

ADN recombinante artificial en la Enfermedad Cerebrovascular Isquémica 

El rt-PA intravenoso (activador del plasminógeno de tipo tisular recombinante) que incluye al fármaco alteplasa, tiene eficacia para mejorar los resultados en la enfermedad cerebrovascular isquémica ya que aumenta la tasa de recanalización por medio de la activación del plasminógeno a plasmina, la cual a su vez produce la disolución del coágulo de fibrina y la formación de productos de degradación de la fibrina. En el estudio se pudo comprobar la eficacia de el rt-PA para la ECV Isquémica incluso en pacientes que están tratados con NOAC. (3)

Ejemplo de un animal transgénico

La peste porcina clásica (PPC) causada por el virus de la peste porcina clásica (CSFV) es una de las enfermedades más perjudiciales y genera importantes pérdidas económicas en la industria porcina. Por ende en el estudio se produjeron cerdos transgénicos (TG) anti-CSFV mediante transferencia nuclear somática (SCNT) y se demostró que estos cerdos transgénicos podrían limitar eficazmente la replicación del CSFV y reducir los signos clínicos y la mortalidad asociados al CSFV, y la resistencia a la enfermedad podría transmitirse de manera estable a la generación F1. (4)

(Cerdo transgénico de la F1)

Referencias Bibliográficas:
1. https://www.news-medical.net/life-sciences/What-is-Recombinant-DNA-(Spanish).aspx
2. http://www.agro.unc.edu.ar/~wpweb/genetica/wp-content/uploads/sites/12/2016/11/CAP%C3%8DTULO-16-.-RECOMBINACI%C3%93N-EN-BACTERIAS.pdf
2. https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/28119380/
3. https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/30543715/

Técnica molecular epigenómica: Secuenciación de miRNAs en Enfermedad Cerebrovascular Isquémica

Se realizó una Secuenciación de microARNs circulantes: miR-125a-5p, miR-125b-5p y miR-143-3p que se asociaron con la ECV isquémica. Se analizaron los niveles de expresión de estos miRNAs hasta 90 días después de la ECV y se reveló una normalización para controlar los niveles de miR-125b-5p y miR-143-3p a partir del día 2, mientras que miR-125a-5p permaneció elevado. Este procedimiento dio como resultado una sensibilidad: 85,6% y una  de especificidad: 76,3 % , es decir, este estudio fue más efectivo que una TAC , por ende puede tener una utilidad clínica como marcador de diagnóstico temprano. (1)

Referencias Bibliográficas:

1. https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/28724745/

Prueba de Tamizaje y confirmatoria de la Enfermedad Cerebrovascular Isquémica

Las pruebas de tamizaje permiten, de manera no tan específica pero estandarizada, conocer el estado en el que se encuentra determinado grupo poblacional en torno a una enfermedad. Para esto se han utilizado escalas de reconocimiento para la Enfermedad Cerebrovascular (ECV), la más recomendada por su sensibilidad, fue la : Escala de evaluación Cincinnati (CPSS) . Un resultado positivo en la escala indica alto riesgo de ECV y la necesidad de evaluación especializada urgente. Las escalas no diferencian entre ECV isquémico y hemorrágico; dicha diferenciación la hace en el hospital un neurólogo o un médico especializado en esa área con la ayuda de pruebas confirmatorias. (1)

Pruebas confirmatorias: estas permiten constatar por su alta especificidad que se trata de una Enfermedad Cerebrovascular y además nos posibilita diferenciar el tipo de ECV. Para esto se realizan los siguientes exámenes:

• Tomografía computarizada (TAC) de cráneo sin contraste: Sirve para el diagnóstico de ECV con signos de isquemia temprana. (2)
• Resonancia Magnética Nuclear (RMN): Más sensible que la TAC, detecta la isquemia cerebral aguda, en pacientes con síntomas dentro de las 12 horas. (2)

Referencias Bibliográficas:
1. https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/30964558/
2. https://www.intramed.net/contenidover.asp?contenidoid=86065

Prueba de Secuenciación o Hibridación para la Enfermedad Cerebrovascular Isquémica

En este estudio se utiliza la técnica de Hibridación fluorescente in situ (FISH) que es una manera de visualizar y mapear el material genético de genes específicos o partes de los genes, en este caso se lo utilizó  para determinar los polimorfismos 106PEAR1 (G> A) y 168PTGS1 (-842A> G), los mismos que tienen un gran impacto en la aparición de la enfermedad cerebrovascular isquémica. Después del análisis se llegó a la conclusión de que el genotipo AA del polimorfismo 106PEAR1 (G> A) fue más común, y que el alelo A también mostró una frecuencia más alta que el alelo G en las personas con ictus isquémico. (1)

Referencias Bibliográficas:
1. https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/31335702/

PCR para Enfermedad Cerebrovascular Isquémica

El Trypanosoma cruzi es un parásito que puede provocar la ECV isquémica, debido a que la presencia de este fenómeno inflamatorio en la pared del vaso sanguíneo es capaz de generar émbolos sépticos y de esta manera obstruir las arterias cerebrales; mediante la técnica molecular de PCR se lo ha podido identificar:

PRUEBA DE PCR PARA DIAGNÓSTICO DE ENFERMEDAD CEREBROVASCULAR ISQUÉMICA
Tema (T)	Detección de Trypanosoma cruzi en tejido y sangre murina por PCR.
Objetivo (O)	Comparación de ADN de Trypanosoma cruzi con qPCR y PCR convencional que provoca ictus isquémico
Tipo de Muestra (M)	Sangre periférica
Secuencia o gen a amplificar (G)	Amplifica un fragmento de 330 pb del minicírculo kinetoplástico
Tipo de ácido nucleico a ser extraído (AN)	ADN genómico parasitario
Extracción (E)	Para las muestras de sangre se utilizó: Kit QIAamp® DNA Mini Kit for Tissue and Body Fluids
Tipo de PCR (PCR)	PCR-convencional; 33 ciclos. D: 94°C ; 2 min H: 64°C ; 1 min E: 72°C ; 2 min
Visualización (V)	EFO (detectado por luz UV en un gel de agarosa al 2% teñido con bromuro de etidio)

Referencias Bibliográficas:
1.http://clacso.redalyc.org/pdf/535/53535594004.pdf

Alteraciones en la Epigenética de la Enfermedad Cerebrovascular Isquémica

Las modificaciones epigenéticas proporcionan una nueva dirección para el estudio de la patogénesis de la enfermedad cerebrovascular isquémica. Se ha encontrado que la metilación del DNA en AHCY está asociada con el ictus isquémico, ya que la S-adenosilhomocisteína hidrolasa (AHCY) es la única enzima que se sabe que cataliza la hidrólisis de S-adenosil-Lhomocisteína (SAH) para producir homocisteína y adenosina. Por lo tanto, esta enzima puede aliviar las actividades inhibitorias de la HSA en las reacciones de transmetilación dependientes de S-adenosil metionina (SAM). (1). Sin embargo, si el gen AHCY ubicado en (20q11.22) se encuentra disfuncional puede tener consecuencias patológicas graves como el ictus isquémico. (2) 

Referencias Bibliográficas:
1. https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/32020847/
2. https://ghr.nlm.nih.gov/gene/AHCY

Alteraciones en la traducción de la Enfermedad Cerebrovascular Isquémica

Una mutación en el gen COL4A1, situado en el brazo largo del cromosoma 13 (13q34), es la responsable de la enfermedad de pequeños vasos cerebrales la cual se relaciona directamente con la enfermedad cerebrovascular isquémica. (1,2)  La alteración en el gen COL4A1 consiste en una falla en la traducción genética debido a que se dan  cambios aminoacídicos en la cadena alfa 1 del colágeno tipo IV, específicamente las mutaciones reemplazan al aminoácido glicina por un aminoácido distinto, evitando así que se forme una molécula completa de colágeno tipo IV, la alteración en esta molécula de colágeno inhibe la formación de redes de proteínas y debilita la membrana basal de los vasos sanguíneos cerebrales dando paso a un ictus isquémico. (2,3)

Referencias Bibliográficas:
1. https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/30877727/
2. https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC6282239/

3. https://ghr.nlm.nih.gov/gene/COL4A1

Alteraciones en la transcripción de la Enfermedad Cerebrovascular Isquémica

El TLR4 es importante en la enfermedad cerebrovascular isquémica, su presencia tiene un papel dual: por un lado, su activación promueve una serie de eventos inflamatorios que exacerban el daño tisular y, por otro, parece estar implicado en procesos de neuroprotección a largo plazo. La señalización de TLR4 activa a NF-κβ. (1,2)

El factor de transcripción NF-κβ (factor nuclear kappa-beta) se localiza en el citoplasma y por un proceso de fosforilación de su inhibidor Ikβ, el  NF- κβ se libera, permitiendo la translocación al núcleo. Ahí se une a secuencias específicas de DNA y activa la trascripción de genes como: citoquinas proinflamatorias (IL-1β, IL-6) y va a inducir la expresión de enzimas como iNOS, COX-2, MMP9, el factor de necrosis tumoral α (TNF-α) entre otros. (2). Estos juegan un importante papel en la alteración del flujo en la micro circulación y en la destrucción tisular. (2,3)

Referencias Bibliográficas:

1. https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/31451099/ 

2. https://eprints.ucm.es/45956/1/T39473.pdf

3. https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0213485316301979

Alteraciones en la genómica de la Enfermedad Cerebrovascular Isquémica

El grupo de investigación en enfermedades neurovasculares del Instituto de Investigación Vall d’Hebron (VHIR) clasifican la enfermedad cerebrovascular isquémica en tres subtipos: cardioembólico, aterotrombótico y lacunar. Cada una de ellas son completamente diferentes a nivel genético. (1)
-Los resultados confirman dos polimorfismos para el ictus cardioembólico, localizados cerca de los genes PITX2 y ZFHX3. (2)

-En cuanto al ictus aterotrombótico, se ha relacionado con un polimorfismo del gen HDAC9 y una región específica del código genético (el locus 9p21), y este último se había asociado con un mayor riesgo de infarto agudo de miocardio. (1,2)

- El ictus lacunar se encontró asociado con un polimorfismo en el gen ALDH2. (3)

Finalmente se encontraron tres nuevos loci asociados al riesgo de enfermedad cerebrovascular tanto hemorrágica como isquémica. (3) 

Y estos son:

• rs1799983, localizado en el gen NOS3
• rs9521634, localizado en el gen COL4A1
• rs720470, cercano al gen DYRK1A

Referencias Bibliográficas:

1. https://gacetamedica.com/hemeroteca/los-tres-subtipos-de-ictus-isquemico-son-enfermedades-distintas-a-nivel-genetico-hwlg_685453/
2. https://www.medigraphic.com/pdfs/revcubneuro/cnn-2014/cnn141m.pdf
3. https://www.tdx.cat/handle/10803/668543#page=53

Enfermedad Cerebrovascular Isquémica

El accidente cerebrovascular (ACV) es un síndrome que incluye un grupo de enfermedades heterogéneas con un punto en común: una alteración en la vasculatura del sistema nervioso central. La enfermedad cerebrovascular isquémica es el tipo más frecuente de accidente cerebrovascular, y esta consiste en una lesión cerebral que provoca la muerte de esta zona o tejido (infarto cerebral) , esto es ocasionado por la oclusión de un vaso arterial e implica daños permanentes por isquemia y por ende no puede suministrar el oxígeno y la sangre necesaria al cerebro. (1)

Referencias Bibliográficas:

1.  http://www.scielo.org.co/pdf/unmed/v60n3/0041-9095-unmed-60-03-00041.pdf

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Les doy una cordial bienvenida a mi blog, mi nombre es Tatiana Anahi Torres Orellana soy estudiante de tercer semestre del paralelo P5, de la carrera de Medicina en la Universidad Central del Ecuador, espero que la información proporcionada en este sitio sea de gran ayuda para tu formación académica, en este blog vas a poder encontrar variedad de videos, noticias médicas y mucha información didáctica, con el fin de que aprendas y a la vez te diviertas.  

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